釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備、轉(zhuǎn)化

更新時間：2013-08-07 點擊次數(shù)：7577

釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備

（1）從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養(yǎng)基，30℃，250 rpm 培養(yǎng)過夜。

（2）測定過夜培養(yǎng)物的OD₆₀₀值為3.0~5.0之間。

（3）將10 ml YPD過夜培養(yǎng)物稀釋至OD₆₀₀值為0.2~0.4。

（4）在28~30℃搖床中繼續(xù)培養(yǎng)3~6 hr，使其OD₆₀₀值達到0.6~1.0。

（5）于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細(xì)胞，棄上清。

（6）用10 ml 洗液洗酵母細(xì)胞，隨后于室溫1500 g 離心5 min離心收集細(xì)胞，棄上清。

（7）用1 ml TE/LiAc重懸酵母細(xì)胞，以每管50 μl 分裝。

釀酒酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化

（1）取50 μl 感受態(tài)細(xì)胞，再加入待轉(zhuǎn)質(zhì)粒各2 μl，混勻。

（2）加入500 μl 轉(zhuǎn)化用溶液（PEG/LiAc，二甲亞砜），彈擊管壁混勻。

（3）30℃水浴1 h，隔15min彈擊管壁混勻。

（4）加入1毫升YPD培養(yǎng)液，30℃搖床培養(yǎng)1小時。

（5）3500 g 離心5 min ，留沉淀，棄上清。

（6）沉淀用150 μl TE重懸，涂相應(yīng)的SD平板；將平板倒置于30℃培養(yǎng)。

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